Mary lahir dina 8 Désémber 1542 di Linlithgow Istana, Skotlandia, ka Raja James V jeung pamajikan kadua Perancis-Na, Mary of Guise. Manéhna cenah geus lahir prematurely jeung éta ngan anak sah James 'ka salamet anjeunna. Manéhna téh grand-keponakan Raja Henry VIII of England, salaku nini paternal nya, Margaret Tudor, ieu adina Henry VIII. Dina 14 Désémber, genep poé sanggeus kalahiran nya, manéhna jadi Ratu Skotlandia lamun bapana maot, meureun ti épék runtuhna saraf sanggeus Battle of Solway Moss atawa ti nginum cai ngotorkeun bari dina kampanye. A dongéng populér, mimiti dirékam ku John Knox, nyebutkeun yen James, sanggeus dédéngéan dina maot-Na nu pamajikanana kungsi dibikeun kalahiran ka putri, ruefully nyatakeun, "Ieu hiji wi' a jeung bakal eta hiji wi' a gadis excentrically lahir ti James 'teu hirup ngaliwatan anjeunna. Mary geus leungit pangrojong nya ngaliwatan putra kadua ti raja Inggris, salaku nini paternal nya, Margaret Tudor, éta adina Henry VIII.
makuta