Mary blev født den 8. december 1542 på Linlithgow Palace, Skotland, til kong James V og hans franske anden kone, Mary of Guise. Hun blev født for tidligt og var den eneste legitime søn af James, der overlevede ham. Hun var stornesøn af kong Henry VIII af England, da hendes farmor, Margaret Tudor, var Henry VIII's søster. Den 14. december, seks dage efter hendes fødsel, blev hun dronning af Skotland, da hendes far døde, måske fra virkningerne af et nervøst sammenbrud efter slaget ved Solway Moss eller fra at drikke forurenet vand, mens på kampagne.
krone