Den 21. december 1941 tog "Ro-33" af sted fra Cam Ranh Bay for at påbegynde sin første krigspatrulje, tildelt et operationsområde i Sydkinesisk Hav øst for Singapore til støtte for den japanske invasion
af britisk Malaya. Hendes patrulje var uforstyrret, og hun forlod sit patruljeområde den 5. januar 1942 for at vende tilbage til Cam Ranh Bay, hvor hun ankom den 7. januar 1942.