I februar 1603 kom dødsfaldet af Catherine Carey, grevinde af Nottingham, niece af hendes fætter og nære ven Lady Knollys, som et særligt slag. I marts blev Elizabeth syg og forblev i en "afgjort og uindfribar melankoli", og sad bevægelsesløs på en pude i timevis. Da Robert Cecil fortalte hende, at hun skulle gå i seng, knækkede hun: "Must is not a word to use to princes, little man". Hun døde den 24. marts 1603 på Richmond Palace, mellem to og tre om morgenen. Et par timer senere satte Cecil og rådet deres planer i bevægelse og proklamerede kong James død.
Richmond Palace