Regimentet blev indkaldt til føderal tjeneste den 12. juli 1861 og rejste til krigens hovedstad, hvor de ankom langs Potomac den 25. august. Den 21. oktober blev det engageret med det største tab blandt alle føderale regimenter i slaget ved Ball's Bluff. I foråret 1862 blev det en del af II Corps of the Army of the Potomac og ledsagede det under Peninsular Campaign, der var engageret i Slaget ved Seven Pines, Savage's Station
, og Glendale med beskedne tab. I april 1862 blev 1. kompagni Massachusetts Sharpshooters knyttet til regimentet, der tjente med det indtil foråret 1863. Efter at have tilbragt det meste af sommeren ved Harrison's Landing, sejlede den i august, lige i tide til at gå glip af slaget ved Second Bull Run. Regimentet gik derefter i gang med Maryland-felttoget, hvor det blev brutalt flankeret af konfødererede i slaget ved Antietam, og mistede over 50% af sine 600 mænd. Under slaget ved Fredericksburg blev den holdt ude af hovedangrebet på Marye's Heights og led relativt få tab. Slaget ved Gettysburg fandt regimentet engageret mod angrebene fra Army of Northern Virginia den 2. og 3. juli 1863 med store tab. I 1864 var regimentets styrke faldet, men det stod stadig over for en hård kampagne med aktion i Slaget om Wilderness, Spotsylvania, Cold Harbor og Belejringen af Petersburg. Den 22. juni havde regimentet kun 75 officerer og soldater. Denne lille gruppe blev taget til fange den dag, da de blev omringet af en konfødereret styrke på Jerusalem Plank Road. De overlevende og prøveløsladte blev mobiliseret ud af den føderale tjeneste den 26. juli 1864, med dets rekrutter og genindskrivninger, der blev overført til den 20. Massachusetts Volunteer Infantry.