Thực hiện Phương pháp ELISA phát hiện kháng thể cúm type A để chẩn đoán bệnh cúm lợn như thế nào?
Hiện nay có rất nhiều các loại kít phát hiện kháng thể cúm khác nhau được cung cấp trên thị trường nên khi sử dụng tuân theo qui trình của nhà sản xuất.
Nếu sử dụng bộ kit chẩn đoán
- Influenza A Virus Antibody Test Kit của IDEXX thì các bước tiến hành được thực hiện như sau:
- Bước 1: Chuẩn bị bộ kit: số mẫu + 01 đối chứng dương + 01 đối chứng âm
- Bước 2: Pha loãng mẫu với tỷ lệ 1/10:10 μl mẫu kiểm tra + 90 μl dung dịch pha loãng mẫu trong ống pha loãng. Sau đó chuyển 100 μl dung dịch mẫu kiểm tra đã pha loãng sang đĩa ELISA với sơ đồ bố trí mẫu tương ứng.
* Nhỏ 100 μl đối chứng âm và đối chứng dương (không pha loãng) vào đĩa ELISA theo vị trí bố trí.
- Bước 3: Vỗ nhẹ đĩa , đậy nắp. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 60 min
- Bước 4: Pha nước rửa đĩa 1X từ dung dịch rửa đĩa 10X có sẵn trong bộ kit.
- Bước 5: Sau 60 min ủ đĩa, đổ bỏ dung dịch trong đĩa, rửa đĩa 3 lần với lượng 300 μl /giếng bằng dung dịch rửa đĩa 1X.
- Bước 6: Nhỏ 100 μl chất gắn kết (conjugate) vào tất cả các giếng. Ủ tiếp đĩa ở nhiệt độ phòng trong 60 min.
- Bước 7: Sau đó đổ bỏ dung dịch trong đĩa, rửa đĩa 3 lần với lượng 300 μl/giếng bằng dung dịch rửa đĩa 1X.
- Bước 8: Nhỏ 100 μl cơ chất vào các giếng, ủ đĩa trong 15 min.
- Bước 9: Dừng phản ứng bằng cách cho 100 μl dung dịch stop vào các giếng.
- Bước 10: Đọc đĩa ở bước sóng 650 nm và tính kết quả.
Phản ứng được công nhận khi:
+ OD của đối chứng âm >0,6
+ OD của đối chứng dương - OD của đối chứng âm ≤ 0,6
S/N= (OD của mẫu -OD của đối chứng âm)
Đánh giá kết quả:
+ Mẫu dương tính: S/N không lớn hơn 0,6
+ Mẫu âm tính: S/N Lớn hơn 0,6

CHÚ THÍCH: - ĐC (-): mẫu đối chứng âm.
 - ĐC (+): mẫu đối chứng dương.
 - S1, S2. S3...,S80: mẫu huyết thanh cần kiểm tra số 1, số 2, số 3,..đến mẫu số 80.