Việc chẩn đoán bệnh Niu cát xơn ở gà có thể thực hiện thông qua những phương pháp nào?
Chẩn đoán phòng thí nghiệm
6.2.1. Phát hiện kháng nguyên
6.2.1.1. Xử lý bệnh phẩm
Bệnh phẩm là phủ tạng, não lấy từ gia cầm chết, bị bệnh nghi nhiễm Niu cát xơn được nghiền thành huyễn dịch 10 % với dung dịch nước sinh lý hoặc PBS. Sau đó ly tâm với tốc độ 1000 xg trong 10 min.
Thu lấy dịch nổi, xử lý vô trùng bằng dung dịch kháng khuẩn (0,1 ml/ 10 ml huyễn dịch) hoặc lọc qua bộ lọc màng 0,45 mm. Huyễn dịch bệnh phẩm đã xử lý có thể dùng để chẩn đoán phát hiện virus Niu cát xơn bằng phản ứng Realtime RT-PCR hoặc phân lập virus trên trứng gà có phôi.
6.2.1.2. Phương pháp Realtime RT- PCR (rRT-PCR)
- Chiết tách ARN của virus Niu cát xơn: theo hướng dẫn của nhà sản xuất kít;
- Tiến hành phản ứng realtime RT-PCR (Phụ lục A).
6.2.1.3. Phân lập virus trên trứng gà có phôi
6.2.1.3.1. Cách tiến hành
- Tiêm truyền huyễn dịch bệnh phẩm vào trứng gà có phôi từ 9 ngày đến 11 ngày tuổi, tiếp tục ấp ở nhiệt độ 37 °C trong 3 đến 5 ngày (Phụ lục C);
- Theo dõi trứng sau khi tiêm, thu hoạch nước trứng (Phụ lục C);
- Làm phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA) (Phụ lục D);
- Giám định các mẫu nước trứng dương tính HA bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) với kháng thể kháng Niu cát xơn chuẩn (Phụ lục E).
- Ngoài ra có thể giám định virus Niu cát xơn bằng phản ứng rRT-PCR.
...