ZCIBIO---WB实验之内参选择
内参即是内部参照（Internal control），是指在组织和细胞中表达相对稳定的一类蛋白质，通常由管家基因编码。这些蛋白质被用作检测蛋白表达水平变化时的参照物，以确定实验的准确性和可重复性。在Western Blot实验中，我们使用内参其实就是使用与内参对应的抗体来检测内参的表达量。由于内参在不同组织和细胞中的表达量相对稳定，通过检测每个样品内参的表达量，我们可以校正上样误差，从而获得更可靠的半定量结果。使用内参还可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全，并检查该实验中的显色或发光体系是否正常。通过选择合适的内参，可以将这些样本之间的差异消除或最小化，减少实验误差，提高结果的可靠性和可重复性。因此，选择合适的内参是Western Blot实验的关键步骤之一。样本种属来源根据所做的蛋白样本的种属确定，哺乳动物一般β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Na+/K+-ATPase等；植物。蛋白表达位置根据研究对象的不同，选择不同的内参对于检测细胞中不同位置的蛋白非常重要。一般情况下，选择β-actin和GAPDH作为总蛋白的内参就可以满足要求。然而，对于细胞质、细胞核、细胞膜等不同位置的蛋白检测，我们需要选择相应的内参，以确保实验结果具有科学性和可靠性。常用内参抗体分子量及其定位情况如下：a.胞浆和全细胞蛋白：β-actin（43KD）、GAPDH（37KD）、Tubulin（55KD）等；b.胞核蛋白：PCNA（29KD）、Histone H3（17KD）等；c.核膜蛋白：Lamin B（66KD）等；d.胞膜蛋白：Na+/K+-ATPase（120KD）等；e.线粒体蛋白：COX IV（17KD）、VDAC1（30KD）等。