基于microRNAs鉴别同卵双生子的法医学探索研究
《基于microRNAs鉴别同卵双生子的法医学探索研究》是依托华中科技大学，由黄代新担任项目负责人的面上项目。
中文摘要
基因组完全相同的同卵双生子（monozygotic twins, MZ）个体的甑别是一个世界性难题。国内外部分学者尝试利用表观遗传标记鉴别MZ个体，虽然取得了一定的进展，但仍未能彻底有效解决MZ的个体识别问题，故探寻新的MZ鉴别指标仍具有重要意义。作为近年来的研究热点，microRNAs广泛参与调节细胞生长发育、分化、凋亡、衰老及疾病的发生，被誉为基因表达的调节器。由此，在体内具有重要调节功能的microRNAs在MZ个体间有否表达差异是我们关注的焦点并得到预试验的初步证实。基于此，本课题拟采用microRNA芯片全面筛选MZ个体间具有显著表达差异的microRNAs，再应用TaqMan MicroRNA Assays技术系统定量研究其在MZ个体间的表达差异程度，旨在探讨以这些差异表达的microRNAs分子作为新指标甑别MZ个体的有效性和应用价值，以期解决MZ个体鉴别这一法医学难题。
结题摘要
基因组完全相同的MZ个体的甑别是一个世界性难题。已有学者尝试利用表观遗传标记鉴别MZ个体，虽取得了一定的进展，但仍未能彻底有效解决MZ的个体识别问题，故探寻新的MZ鉴别指标仍具有重要意义。本课题旨在探索MZ个体间microRNAs表达谱差异，寻找甑别MZ个体的新指标。我们首先采用microRNA芯片对7对不同年龄和性别的MZ个体血样的microRNAs表达谱进行了检测分析，并采用定量PCR对差异表达的microRNAs进行了验证。结果发现在≥4对MZ间具有共同表达差异的microRNAs 29个，从中挑选了11个采用定量PCR进行验证，除miR-339-5p外，其余microRNAs检测结果与芯片结果完全一致。结合定量PCR验证结果及microRNAs的绝对表达量，最终确定miR-142-3p、miR-4325、miR-3653-3p等20个microRNAs作为靶标记用于MZ个体的鉴别。然后采用qRT-PCR对64对MZ样本进行上述20个靶microRNAs标记检测，以MZ两个体间存在≥1个microRNAs具有显著表达差异者记为有效甑别。结果在64对MZ中，有38对可有效甑别，甑别率为59.4%。38对可甑别的MZ中，差异表达的靶microRNAs个数最少仅1个，最多的为13个，平均5.8个。所有20个靶microRNAs中，以let-7i-5p鉴别能力最强，38对可有效甑别的MZ中，有20对存在该靶标记的表达差异，miR-222-3p次之，第三为miR-151a-3p。此外，从38对MZ的靶microRNAs定量检测结果发现存在一定的年龄相关性，即年龄越大的MZ个体间差异表达的靶microRNAs个数相对越多，年龄越小的MZ差异表达的靶microRNAs个数相对较少。本研究证实了MZ个体间存在microRNAs表达谱差异，可用作甑别MZ个体的新的生物学指标。